Экспериметальные данные по изучению лекарственного препарата простатотропного действия Простанорма

В состав ПростаНорма® входят экстракты из растений, обладающие как собственно простатотропной активностью, так и улучшающие микроциркуляторные процессы в предстательной железе, усиливающие (нормализующие) мочеотделение, оказывающие противовоспалительное, капилляропротекторное и антимикробное действие. Специфическую фармакологическую активность ПростаНорма® обуславливает, прежде всего, присутствие в его составе тритерпеновых и флавоноидных гликозидов из солодки. Так, установлено, что отвар из очищенных корней солодки обладает выраженной гонадотропной, андрогенной и диуретической активностью и его рекомендуется использовать для профилактики и лечения простатита (Патент N 2058152 от 10.11.94). Кроме того, показано, что тритерпеноиды из солодки обладают антиаллергическими, антитоксическими, гипохолестеринемическими, антирадикальными, а флавоноиды, кроме того, еще и противомикробными и антиоксидантными свойствами (Вичканова С.А., 1981; Бондарев А.М. и др., 1995; Takagi, 1969; Segal, 1970; Kenzo et al., 1989, Ju et al., 1990). Экстракт травы золотарника входит в состав препаратов «Инконтурин», «Простафортон», «Антипростин», «Простамед», «Цефасабаль» (Германия), применяемых при простатитах, аденоме простаты, ночном недержании мочи, цистите (Lutomski et al., 1987). Диуретический, противовоспалительный и «камнерастворяющий» эффекты золотарника присущи флавоноидам из золотарника (Батюк В.С. и др., 1988). Активность флавоноидсодержащего растения зверобоя описана в предыдущем разделе. Препараты эхинацеи пурпурной, в частности, препарат «Эстифан» (сухой экстракт травы эхинацеи), применяются как иммуностимулирующие средства (Сакович Г.С., Колхир В.К., 2001). Они также проявляют андрогенную и улучшающую потенцию активность.

При биохимическом тестировании показано, что ПростаНорм® в ферментных тест-системах оказывал прямое влияние на активность ферментов антиоксидантной активности, НАДФН-оксидазы, моноксигеназую активность цитохрома P450, что характеризовало его как потенциального антимикробного, иммуностимулирующего, и детоксицирующего средства. На основании вышеизложенного были проведены необходимые исследования с целью разработки препарата для лечения хронического простатита.

ПростаНорм® изучали в виде двух препаратов – ПростаНорма® жидкого (ПЖ) и ПростаНорма® сухого (ПС) в условиях одних и тех же экспериментальных моделей. Специфической активностью для ПростаНорма® как препарата для лечения простатита должна являться его противовоспалительная, капилляропротекторная, анальгетическая, диуретическая, антимикробная и андрогенная активность.

Противовоспалительные свойства.

Противовоспалительное действие ПростаНорма® изучали при его однократном внутрижелудочном введении в дозах 0,2-0,6 мл/мышь, 0,5-2 мл/крысу (ПЖ) или 20-100 мг/кг (ПС) на моделях острого воспалительного отека задней конечности у мышей, и на модели перитонита у крыс. Установлено, что ПростаНорм® и в жидком и сухом виде проявляет выраженную противовоспалительную активность, что выражалось в достоверном уменьшении на 15-50% количества воспалительного экссудата в брюшной полости у крыс и выраженности формалинового и гистаминового отеков конечностей у мышей по сравнению с контролем (Табл. 19). Зависимость эффекта от дозы более четко проявлялась в случае ПС.

Ангиопротекторные свойства.

Капилляропротекторное действие ПростаНорма® изучали при его однократном внутрижелудочном введении в дозах 0,2-0,6 мл/мышь (ПЖ) и 20-100 мг/кг (ПС) на модели повышенной сосудистой проницаемости кожи у мышей. Экспериментальные исследования показали, что ПростаНорм® обладает выраженным капилляропротекторным действием, достоверно увеличивая время выхода трипановой сини в очаг воспаления на 32-50% по сравнению с контролем (Табл. 19).

Таблица 1. Влияние ПростаНорма® на воспалительный отек конечностей у мышей,
экспериментальный перитонит у крыс и проницаемость капилляров кожи у мышей

 

Вариант опыта Формалиновый отек, мг

(% к контролю)

Гистаминовый отек, мг

(% к контролю)

Перитонеальный экссудат, мл

(% к контролю)

Время выхода

трипановой сини,

сек (% к контролю)

Контроль 60,6± 3,15 37,3± 2,96 1,93± 0,29 68,3± 5,9
ПЖ, 0,2мл/мышь 60,6± 2,75 29,6± 1,76 (-21) 91,6± 5,4*(+34)
ПЖ, 0,4мл/мышь 49,0± 3,97 (-19) 26,8± 2,95 (-25) 90,8± 2,4*(+32)
ПЖ, 0,6мл/мышь 46,4± 3,95*(-24) 27,3± 2,36*(-27) 100,0± 5,0**(+46)
ПЖ, 0,5мл/крысу 1,64± 0,29 (-15)
ПЖ, 1,0мл/крысу 1,54± 0,19 (-20)
ПЖ, 2,0мл/крысу 0,97± 0,24*(-50)
Контроль 71,0± 4,5 61,0± 1,75 1,75± 0,16 75,0± 2,23
ПС, 20 мг/кг 58,3± 3,33 (-18) 51,5± 1,8*(-16) 1,33± 0,22 (-24) 99,6± 1,05**(+33)
ПС, 50 мг/кг 54,2± 2,38*(-24) 46,6± 2,47**(-24) 103,3± 2,78**(+38)
ПС, 100 мг/кг 49,1± 2,39*(-31) 33,3± 2,47**(-45) 1,08± 0,19* (-38) 112,1± 5,23**(+50)

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

 

Анальгетические свойства.

Анальгетический эффект ПростаНорма® изучали путем определения порога болевой чувствительности (ПБЧ) по методике «горячая пластинка», на моделях «уксуснокислых корчей» у мышей и «давления на лапу» у крыс. Механизм развития болевого синдрома при термическом воздействии включает в себя эмоциональную реакцию на боль (в этой модели боли ведущую роль играют центральные механизмы); при раздражении брюшной полости кислотой на первый план выступают гуморальные механизмы болевой чувствительности, а в случае давления на лапу – раздражение периферических болевых рецепторов. Показано, что в условиях «горячей пластинки» однократное внутрижелудочное введение простанорма в дозах 20-50-100 мг/кг (ПС) и 0,2-0,6 мл/мышь (ПЖ) увеличивало ПБЧ на 12-70% на протяжении всех трех часов эксперимента по сравнению с исходным уровнем (Табл. 20). В случае ПЖ обезболивающий эффект возрастал с увеличением дозы. ПС в дозах 50 и 100 мг/кг достоверно на 18 и 25% уменьшал количество корчей у мышей, а в дозах 20 и 100 мг/кг также достоверно повышал на 39 и 44% отношение ПБЧ через 60 минут после введения препарата (ПБЧ60) к ПБЧ исходному (ПБЧисх) по сравнению с контролем (Табл. 20). Результаты изучения анальгетических свойств простанорма с использованием трех экспериментальных моделей свидетельствуют, что заметную активность препарат проявляет как в условиях моделей, сопровождающихся острым воспалительным процессом – модели «горячая пластинка» и уксусно-кислые «корчи» (согласуется с результатами изучения его противовоспалительных свойств), так и при воздействии на периферические болевые рецепторы. Полученные данные свидетельствуют в пользу определенной универсальности анальгетического воздействия простанорма на организм.

 

Таблица 2. Влияние ПростаНорма® на порог болевой чувствительности (ПБЧ)
на моделях «горячая пластинка» и «уксусные корчи» у мышей, «давление на лапу» у крыс

 

Вариант

опыта

«Горячая пластинка» «Корчи» «Лапа»
ПБЧ,%, (исходно –100%) после введения …. Количество% ПБЧ60/ПБЧисх,

%

30 мин 60 мин 120 мин 180 мин
Контроль 116± 7 116± 6 117± 8 111± 8 100± 3 100± 7
ПС, 20 мг/кг 158± 6** 161± 7** 152± 8* 150± 9* 88± 5 139± 6*
ПС, 50 мг/кг 146± 7* 150± 8* 150± 8* 143± 10 82± 4*
ПС, 100 мг/кг 145± 7* 149± 8* 153± 7* 149± 10* 75± 5** 144± 7**
Контроль 94± 7 106± 8 88± 5 93± 5
ПЖ, 0,2мл/м 113± 7 121± 7 119± 6* 124± 6*
ПЖ, 0,6мл/м 153± 8** 169± 7** 171± 7** 161± 6**

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

 

Диуретические свойства.

Диуретическое действие ПростаНорма® изучали при однократном внутрижелудочном введении крысам в дозах 50 и 100 мг/кг (ПС) и 1 мл/100 г массы крысы (ПЖ). ПростаНорм® достоверно усиливал стимулированный водной нагрузкой диурез у крыс. В случае ПС эффект возрастал с дозой препарата: суммарный (за 5-ть часов) диурез увеличивался с 43% (50 мг/кг) до 76% (100 мг/кг) по сравнению с контролем (Табл. 21).

 

Таблица 3. Влияние ПростаНорма® на диурез у крыс

 

Показатель Контроль ПЖ, 1 мл/100г ПС, 50 мг/кг ПС, 100 мг/кг
Диурез, мл/100 г,

% от контроля

2,95± 0,27 5,4± 0,32**

+83,1

4,22± 0,16*

+43,1

5,2± 0,17**

+76,3

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

Гонадотропные и андрогенные свойства.

Целью изучения влияния ПростаНорма® на половую гормональную активность крыс было выявить тропность препарата к половым органм. Гонадотропную активность ПростаНорма® изучали при его внутрижелудочном введении в течение 10 дней в дозе 100 мг/кг (ПС) и 10 мл/кг (ПЖ) инфантильным крысам-самцам (возраст 21-23 дня). На 11 день животных забивали эфиром, извлекали половые железы, мышцу levator ani, гипофиз и определяли их массу. Введение ПростаНорма® приводило к достоверному увеличению массы семенных пузырьков на 25 и 28% и массы вентральной простаты на 30 и 34% по сравнению с контролем (Табл. 22). Полученные данные свидетельствуют о гонадотропном действии ПростаНорма®. Небольшое увеличение мышцы levator ani в экспериментах с ПЖ предполагает наличие у препарата некоторых анаболических свойств.

Андрогенную активность ПростаНорма® изучали на гонадэктомированных инфантильных крысах-самцах. Препарат вводили внутрижелудочно в дозах 100 мг/кг (ПЖ) и 10 мл/кг (ПС) в течение 7 дней, начиная со следующего дня после гонадэктомии, на фоне введения тестостерона-пропионата. Установлено, что в условиях данной модели после введения ПростаНорма® в дозе 100 мг/кг масса семенных пузырьков достоверно увеличилась на 42% (ПС) и 60% (ПЖ) по сравнению с контролем (Табл. 22). Полученные данные свидетельствуют об андрогенной активности препарата.

 

Таблица 4. Влияние ПростаНорма® на массу половых желез и органов инфантильных и гонадэктомированных крыс

 

Вариант

опыта

Масса органа, прирост в% к контролю
Семенные пузырьки Вентральная простата Семенники Гипофиз Мышца

levator ami

Инфантильные крысы
ПЖ, 10 мл/кг +28* +34* +14 +12 +20*
ПС, 100 мг/кг +25* +31* +3 +2 +8
Гонадэктомированные крысы
ПЖ, 10 мл/кг +60** +20 +19*
ПС, 100 мг/кг +42** +11 +7

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

 

Антимикробные свойства.

Подробно изучены антимикробные свойства ПростаНорма® сухого. В результате исследований влияния ПростаНорма® на клинические штаммы, выделенные от больных, в числе которых было 46 штаммов бактерий, обладающих высокой степенью резистентности к широко применяемым в настоящее время антибиотикам, и 5 штаммов дрожжеподобных грибов рода Candida показано, что грамположительные бактерии рода Staphylococcus и Streptococcus (Enterococcus) были чувствительны к препарату. При этом его ингибирующий эффект в отношении резистентных к лекарствам бактерий был не ниже, чем в отношении антибиотикочувствительных штаммов бактерий. Наиболее высокая активность ПростаНорма® проявилась в отношении разных видов стафилококка (St. aureus, St. epidermidis, St. saprophyticus) и стрептококка (Str. fecalis, род Enterococcus), играющих важную роль в этиологии инфекционно-воспалительных неспецифических заболеваний предстательной железы и мочевыводящих путей. При этом установлен весьма важный факт, что ПростаНорм® не подавляет рост грамотрицательных бактерий рода Escherichia, что может иметь положительное значение при клиническом применении препарат, который не будет подавлять нормальную микрофлору кишечника.

Гастропротективные и гепатопротективные свойства.

Известно, что тритерпеновые и флавоноидные гликозиды из корней солодки проявляют противоязвенную активность, также как и флавоноиды из травы зверобоя (Соколов С.Я., Замотаев И.П., 1989; Машковский М.Д., 2000). Поэтому изучение гастропротекторных свойств ПростаНорма® было проведено достаточно подробно, с использованием моделей экспериментальных язв желудка у крыс различного генеза: острые — этаноловые, индометациновые и вызванные перевязкой привратника (по Шею), хронические – кофеиново-мышьяковистые. Критериями оценки гепатопротекторного действия препарата служили изменения активности печеночных ферментов монооксигеназной системы цитохрома P450 на модели повреждения печени крыс кофеиново-мышьяковистой смесью.

Внутрижелудочное введение препарата животным в дозах 10 мл/кг (ПЖ) или 100 мг/кг (ПС) до или на фоне действия ульцерогенных) оказывало защитное действие на слизистую желудка крыс (Табл 23). Наиболее отчетливый гастрозащитный эффект препарата проявлялся на моделях этаноловых язв и язв по Шею. Это выражалось в снижении на 70 и 57% числа «больных» крыс, уменьшении на 76-97% частоты образования и площади язвенных дефектов, а также снижении более чем в 10 раз индекса Паулса по сравнению с контролем.

При изучении гепатопротективного действия ПЖ установлено, что активность микросомальных ферментов гидроксилирования и деметилирования, рассчитанная на молярную концентрацию цитохрома P450, у леченных животных возрастает на 31 и 43%, соотвественно, по сравнению с контролем (Табл. 24). Положительное влияние ПростаНорма® на микросомальную монооксигеназную систему печени крыс свидетельствует о детоксицирующем и защитном (гепатопротекторном) действии препарата на печень. Полученные результаты согласуются с данными биохимического тестирования in vitro.

 

Таблица 5. Влияние ПростаНорма® на экспериментальные язвы желудка у крыс

 

Вариант

опыта

Крысы с язвами,% Степень

изъязвления,%

Индекс

Паулса

Терапев.

эффект

Площадь язв,% Индекс

Паулса

Терапев.

эффект

Индометациновые язвы
Контроль 100 100± 13 14,5 100± 17 34,8
ПЖ, 10мл/кг 100 43± 10** 6,2 2,3 12± 5* 4,0 8,7
Этаноловые язвы
Контроль 100 100± 8 2,9 100± 4 34,1
ПЖ, 10мл/кг 28,8 24± 14** 0,3 14,5 15± 6** 1,4 24,4
Язвы, вызванные перевязкой привратника
Контроль 100 100± 27 19,2 100± 25 14,4
ПЖ, 10мл/кг 42,8 7± 15* 0,6 3,2 3± 10* 0,2 72,0
Кофеиново-мышьяковистые язвы
Контроль 100 100± 27 7,4 100± 21 22,7
ПЖ, 10мл/кг 88,9 55± 21 3,6 2,0 56± 17 11,4 2,0
ПС, 100мг/кг 28,3 58± 16 1,1 6,0 6± 15* 0,3 76,0

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

 

Таблица 6. Влияние ПростаНорма® (10 мл/кг) на микросомальную
монооксигеназную систему печени крыс, отравленных кофеиново-мышьяковистой смесью

 

 

Вариант опыта

Содержание

цитохрома P450

Скорость реакции
нмоль

на мл

нмоль на мг белка Гидроксилирования

анилина

N-деметилирования диметилаланина
нмоль/мин на мг белка нмоль/мин на мг P450 нмоль/мин на мг белка нмоль/мин на мг P450
Контроль 16,25± 0,02 0,65± 0,02 0,8± 0,02 1,23± 0,03 1,39± 0,06 2,14± 0,08
Опыт 15,3± 0,44 0,5± 0,01** 0,59± 0,02** 1,61± 0,01** 1,12± 0,03* 3,06± 0,01**
Опыт/контроль,% 94 77 74 131 81 143

* или ** — достоверность отличий от контроля при p<0,05 или p<0,01

 

Иммуностимулирующие свойства.

Одним из компонентов ПростаНорма® является экстракт эхинацеи пурпурной, препараты из которой самостоятельно используются в широкой медицинской практике как иммуностимуляторы, в частности препарат «Эстифан» (Сакович Г.С., Колхир В.К., 2000). Поэтому представляло интерес провести сравнительное изучение иммунотропных свойств обоих препаратов. На базе НИЦ БМТ ВИЛАР была проведена оценка влияния ПростаНорма® на фагоцитарную активность полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПЯЛ) человека, в сравнении с эффектом эстифана, в условиях опытов in vitro по усилению люминол-зависимой хемилюминисценции стимулированной опсонизированным зимозаном. Исследование показало, что предварительное инкубирование ПЯЛ с ПростаНормом® или эстифаном (0,3 мг/мл) приводит к усилению ответа на зимозан. Это явление носит название предстимуляции или прайминга. Индекс предстимуляции, рассчитанный исходя из экспериментальных данных, был максимален для ПростаНорма® – 166%. По данному показателю ПростаНорм® превосходил эстифан. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о стимулирующем влиянии ПростаНорма® на фагоцитоз, и по этому параметру препарат может быть охарактеризован как иммуностимулятор.

Присутствие в составе ПростаНорма® флавоноидных фракций из зверобоя (известны его антидепрессантные свойства – Горьков В.А. и др., 2000) в сочетании с тритерпеноидами солодки может способствовать проявлению препаратом нейротропной активности. Показано, что ПростаНорм® (20 и 100 мг/кг, внутрь) проявлял стресс-протективную и антидепрессантную активность, оказывая положительное влияние на поведение крыс в «Тесте экстраполяционного избавления по Хендерсону» и «Тесте поведенческого отчаяния по Порсолту». В условиях модели гипоксической гипоксии с гиперкапнией препарат достоверно повышал (до 30%) устойчивость крыс к гипоксии, оказывая антигипоксический эффект.

Таким образом, ПростаНорм® в жидкой и сухой форме обладает комплексом фармакологических свойств, характеризующих его как простатотропное средство, из которых главными являются: противовоспалительные, капилляропротекторные, анальгетические, диуретические, антимикробные и андрогенные. Наличие такого спектра фармакологической активности у препарата позволяло надеяться на его благоприятное лечебное воздействие как при хроническом неспецифическом абактериальном простатите, так и при простатите, осложненном грамположительными антибиотикорезистентными бактериями. Установленные нейротропные и иммуностимулирующие свойства препарата могут усиливать в целом лечебный эффект при простатите. Выраженные гастропротективные свойства ПростаНорма® служат ему дополнительной положительной характеристикой.

Исследование безопасности ПростаНорма®.

Изучение безопасности ПростаНорма® жидкого и сухого проводили в соответствии с указаниями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2000)». По параметрам острой токсичности препарат следует отнести к VI классу относительно безвредных препаратов. В хронических экспериментах на крысах (10-100-кратное превышение терапевтической дозы) и 3-месячных экспериментах на собаках, получавших ПЖ как лекарственную форму в пятикратной терапевтической дозе, и ПС, в лекарственной форме таблетки по 0,2 г, не выявлено изменений морфологических и биохимических показателей крови, функционального состояния сердечно-сосудистой и центральной нервной систем, печени и почек. Это подтверждалось и патоморфологическими исследованиями внутренних органов животных. Препарат не обладал местнораздражающими, аллергизирующими, иммунотоксическими, эмбриотоксическими свойствами, не влиял на репродуктивные функции подопытных животных.